物基因型快速鑒定試劑盒，即Rapid Plant Genotyping Assay Kit植物樣品直接PCR預(yù)混液(2X)，提供了一種使用特別便捷的all-in-one的2倍濃度的檢測(cè)試劑，加入一小塊植物葉片等柔嫩的組織和適量的引物和水，就可以直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增，后續(xù)直接電泳觀察結(jié)果就可以判斷植物的基因型了。本產(chǎn)品不僅可以用于植物的基因型鑒定，也可以用于其它適當(dāng)用途的植物樣品的直接PCR檢測(cè)，可以輕松完成長度達(dá)到5kb的DN**段的擴(kuò)增。
本試劑盒提供了可專門用于植物樣品的2倍濃度的PCR預(yù)混液，并且PCR結(jié)束后可以直接上樣電泳無需添加上樣緩沖液。本產(chǎn)品含有耐葉綠素的PlantTaq? DNA聚合酶，這是一種經(jīng)過基因工程改造的非常高效的適用于植物樣品直接PCR檢測(cè)的耐熱DNA聚合酶。
對(duì)于植物葉片等柔嫩樣品可以直接PCR檢測(cè)，無須提取DNA。本產(chǎn)品對(duì)玉米、絲瓜、甜椒、豆角、黃豆、辣椒、黃瓜、茄子、番茄等植物樣品中的葉綠素、多糖、多酚等各種PCR抑制劑表現(xiàn)出超強(qiáng)的抗性，對(duì)于新鮮采集的、4℃保存或低溫凍存的這些植物的葉片、嫩種子等，都無需進(jìn)行DNA提取純化，可以直接用于PCR擴(kuò)增目的DNA。
所需樣品少，耐受能力高。本產(chǎn)品用于20μl的PCR擴(kuò)增體系時(shí)，通常僅加入0.1-1mm直徑葉片即可順利完成PCR檢測(cè)。
本產(chǎn)品提供了一對(duì)陽性對(duì)照引物，便于確認(rèn)PCR檢測(cè)效果。該對(duì)引物是多種植物的通用引物，可以擴(kuò)增多數(shù)植物葉綠體中高度保守的IRB18基因的297bp DN**段。
本產(chǎn)品用于植物葉片檢測(cè)的效果參考圖1。圖中可見，本產(chǎn)品對(duì)多種常見植物葉片都有很好的PCR擴(kuò)增效果。
圖1. 植物基因型快速鑒定試劑盒檢測(cè)圖中所示不同植物葉片中目的基因的實(shí)測(cè)效果圖。使用植物基因型快速鑒定試劑盒中提供的Easy-Load? Plant Direct PCR Master Mix (2X)和Control primer mix，在PCR體系中直接加入不同植物葉片，用于擴(kuò)增IRB18基因的297bp DN**段后的電泳效果圖。M, DNA marker ；1, 豆角(Cowpea)；2, 黃豆(Soybean)；3, 絲瓜(Sponge gourd)；4, 甜椒(Capsicum)；5, 玉米(Maize)；6, 黃瓜(Cucumber)；7, 辣椒(Pepper)；8, 茄子(Eggplant)；9, 番茄(Tomato)。
本產(chǎn)品擴(kuò)增不同長度目的基因的效果參考圖2。圖中可見，本產(chǎn)品以番茄葉為模板可直接PCR擴(kuò)增出長達(dá)5kb的DN**段。
圖2. 植物基因型快速鑒定試劑盒直接以番茄葉片為模板擴(kuò)增不同長度的目的基因的效果圖。M, DNA marker; 1, IRB18(297bp)；2, actin(693bp)；3, rbcL(1201bp)；4, rpoC2(2069bp)；5, rpoC2(3079bp)；6, rpoC2(3942bp)；7, rpoC2(5000bp)。
本產(chǎn)品擴(kuò)增獲得的PCR產(chǎn)物帶有3'-dA overhangs的粘性末端，可直接用于和T載體連接進(jìn)行TA克隆。
用途：植物葉片等比較柔嫩的組織樣品基因組DNA中目的基因的直接擴(kuò)增、基因分型(如基因缺失等)，以及基因敲除或轉(zhuǎn)基因植物基因型分析。
失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Easy-Load? Plant Direct PCR Master Mix (2X)中含有的PlantTaq? DNA Polymerase失活。
本產(chǎn)品如果用于50微升的PCR反應(yīng)體系，兩種包裝的本產(chǎn)品分別足夠用于40個(gè)和200個(gè)反應(yīng)；如果用于20微升的PCR反應(yīng)體系，兩種包裝的本產(chǎn)品分別足夠用于100個(gè)和500個(gè)反應(yīng)。
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D7292S-1 | Easy-Load? Plant Direct PCR Master Mix (2X) | 1ml |
| D7292S-2 | Control primer mix (10μM each) | 25μl |
| — | 說明書 | 1份 |
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D7292M-1 | Easy-Load? Plant Direct PCR Master Mix (2X) | 1ml×5 |
| D7292M-2 | Control primer mix (10μM each) | 125μl |
| — | 說明書 | 1份 |
-20℃保存。適當(dāng)避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)：由于PCR反應(yīng)非常靈敏，在使用本產(chǎn)品時(shí)請(qǐng)注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對(duì)照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。
設(shè)置PCR反應(yīng)體系時(shí)，20μl和50μl PCR體系中植物樣品的推薦用量分別為0.1-1mm和0.3-3mm直徑葉片或類似大小其它比較柔嫩的植物組織，可以直接添加到PCR體系中，無需進(jìn)行任何額外處理。經(jīng)測(cè)試本產(chǎn)品適用于柔嫩新鮮種子的直接PCR，但不適用于干硬種子的直接PCR。
PCR反應(yīng)結(jié)束之后，酌情3000-5000g離心3-5min以沉淀植物組織碎片，便于吸取上清用于電泳分析等。
需自備Nuclease-Free Water。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。