女人与狗锁死了视频大全|霍金死亡过程恐怖视频|无节社团简谱季免费观看|六间房直播大厅|中文字幕欧美另类精品|久久人人玩人妻潮喷内射人人|亚洲国产一区二区三区在线观看

達(dá)麥迪生物秋爽價(jià)震撼來(lái)襲！

活動(dòng)時(shí)間：8月15日-9月24日

客服熱線：4006-400-850

T4 DNA連接酶（快速）

產(chǎn)品描述
T4 DNA連接酶催化雙螺旋DNA或RNA的5′磷酸末端基團(tuán)和3′羥基末端基團(tuán)之間形成磷酸二酯鍵。該酶能夠有效的連接平末端和黏性末端，同時(shí)修復(fù)雙螺旋DNA、RNA或DNA/RNA雜交鏈中的單鏈缺口。

蛋白來(lái)源
攜帶克隆的T4 DNA連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。
組成成分：
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25°C
隨酶提供：
B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)
B6030 (10X T4 DNA Ligase Buffer)
2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
132mM Tris-HCI
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6000
pH 7.6 @ 25°C
10X T4 DNA Ligase Buffer (B6030):
500mM Tris-HCI
100 mM MgCl2
50 mM DTT
10 mM ATP
pH 7.6 @ 25°C

單位定義
1 unit 被定義為23°C下、30分鐘內(nèi)，在50 μl 1X T4 DNA連接酶緩沖液中能夠連接50%的具有粘性末端的100 ng DN**段的DNA連接酶量。

產(chǎn)品信息
T4 DNA Ligase (Rapid)
Part Number L6030-HC-F
Concentration 600,000 U/ml
Unit Size 26,000 U
SDS Available on request

產(chǎn)品特性
Storage Temperature -25 to -15°C
Test Specification
Purity (SDS-PAGE) >99%
Specific Activity 300,000 U/mg
SS Exonuclease 6,000 U <1.0% released
DS Exonuclease 6,000 U <1.0% released
DS Endonuclease 6,000 U = no conversion
E.coli DNA Contamination 6,000 U <10 copies

產(chǎn)品要點(diǎn)：
T4 DNA連接酶是ATP依賴(lài)的酶。建議舍棄在-20°C儲(chǔ)存一年的反應(yīng)緩沖液，用新鮮的緩沖液代替以確保最大性能。當(dāng)把一個(gè)嵌入物當(dāng)做目標(biāo)靶物：矢量比在2到6之間時(shí)，單個(gè)嵌入的連接反應(yīng)是最佳的。6:1以上的比率將會(huì)促進(jìn)多重片段的嵌入，當(dāng)下降到2:1比率時(shí)，將會(huì)降低連接效率。
對(duì)于有疑問(wèn)的連接反應(yīng)或如果DNA濃度是未知的，那就有必要將比率多樣化并進(jìn)行多重連接反應(yīng)。
高濃度的PEG將會(huì)顯著的降低電能細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。為了將電能細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率最大化，下面給出寫(xiě)推薦的方法：
最好的：在接下來(lái)的連接反應(yīng)中，利用DNA凈化吸附柱來(lái)凈化產(chǎn)物，并用50uL的TE洗提。DNA即準(zhǔn)備轉(zhuǎn)化。DNA最終被轉(zhuǎn)化的量應(yīng)該在0.1-10 ng的范圍之間。
較好的：在ddH20 或TE中稀釋連接產(chǎn)物將會(huì)降低PEG濃度。DNA最終被轉(zhuǎn)化的量應(yīng)該在0.1-10 ng的范圍之間。
高濃度的T4 DNA連接酶與2X快速連接緩沖液相結(jié)合能夠顯著提高平末端連接的速度和效率，因此不建議有較長(zhǎng)的潛伏期（>10分鐘），因?yàn)殚L(zhǎng)的潛伏期能夠顯著的降低連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化效率。為了將正確嵌入或矢量結(jié)合的轉(zhuǎn)化效率最大化，建議使用下面的方案。
酶的10X T4 DNA連接酶緩沖液不包含PEG，并與標(biāo)準(zhǔn)連接反應(yīng)方案一致，該方案并沒(méi)指定利用快速的緩沖區(qū)規(guī)格。

操作說(shuō)明：
反應(yīng)體系:
體積 組分 終濃度
10 μL 2X Rapid Ligation Buffer 1X
X μL Vector 1-10 ng/μL
X μL Insert 1-10 ng/μL
1 μL T4 DNA Ligase (600 U/ μL) 30 U/μL
X μL Type I Water N/A
20 μL 總體積
加入以上所有成分于反應(yīng)管中，吹打混勻，25℃，10min孵育，立即使用PCR洗脫柱進(jìn)行DNA的純化，洗脫于50ulTE或雙蒸水存儲(chǔ)或者直接進(jìn)行稀釋?zhuān)ㄏ♂尡壤辽?：10）并進(jìn)行轉(zhuǎn)化，將0.1-10ng 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入相應(yīng)載體的電轉(zhuǎn)或鈣轉(zhuǎn)的感受態(tài)細(xì)胞中。

參考文獻(xiàn)
Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982) P.D. Boyer (Eds.), The Enzymes, 5, pp. 3. San Diego: Academic Press.

適用范圍
該產(chǎn)品被研制、生產(chǎn)加工及銷(xiāo)售，僅用于體外，不適用于人類(lèi)和動(dòng)物注射。

活動(dòng)將同步于丁香通8.24-9.24秋季促銷(xiāo)活動(dòng)以及科苑商城店鋪促銷(xiāo)!