取出SAlexa Fluor染料離心數秒，將管中干粉甩至管底。注：未離心前請勿開蓋，以免造成損失。
2
SAlexa Fluor管中加入40mL DMSO用漩渦混勻儀混勻10~20s，至SAlexa Fluor全部溶解，瞬離5~10s，使溶解后的SAlexa Fluor溶液離心至管底。
3
抗體中加入1/10體積的調整緩沖液。
4
將溶解后的SAlexa Fluor加入抗體中(每0.1mg抗體中加入2mLSAlexa Fluor)，用移液槍反復吹打混勻或用漩渦混勻儀混勻10~20s。
5
將抗體與SAlexa Fluor混合物置水平搖床或旋轉混勻儀，在搖動狀態下室溫避光反應1~2小時。
03
游離SAlexa Fluor染料的去除
1
將純化柱下方堵頭掰斷，1000×g離心1 min倒掉保護液，將純化柱移至新的收集管中。
2
將0.2 mL PBS加入管中，待全部滲入填料后，1000×g離心1min，重復2次。
3
將標記反應液加入到純化柱填料表面。如果樣品體積小于50mL，用試劑盒中的PBS補齊至50mL。上樣體積最大不要超過200mL。
4
待樣品滲入填料后，1000×g離心2min，收集純化的蛋白溶液。
5
將抗體標記物4℃避光保存待用。
04
標記抗體保存
標記抗體可4℃避光保存，也可以根據需要選擇加入BSA、防腐劑、甘油等成分保證產品穩定。
*推薦保存液：0.01M PBS(pH7.4) 含1%BSA,0.03%
Proclin300和50%甘油，可-20℃保存一年。
05
染料-蛋白質比率的計算
1
用PBS稀釋少量標記蛋白。
2
使用路徑長度為1cm的比色皿，在280nm處測量吸光度和特定染料的Amax（見附表）
3
計算蛋白質濃度
C(mg/mL)={[A280-(Amax× Cf)]/1.4}×稀釋因子。
√C是染料-蛋白共軛物濃度；
√A280和Amax分別是在280nm處的吸光值以及在Amax波長處的吸光值；
√Cf是染料校正因子見附表；
√稀釋因子是在光度測量時的稀釋倍數
4
計算標記率的方法如下
DOL=(Amax×Mwt×稀釋因子）/(ε×C)
√C是染料-蛋白共軛物濃度；
√Mwt是IgG的分子量；
√ε是染料的摩爾吸光系數見附表。
注意事項
1. NHS酯類染料對水分敏感，SAlexa Fluor需現用現配；
2. 低濃度的疊氮鈉（0.02%）和10%甘油不會明顯干擾蛋白質的標記。但含有氨基的溶液及大于10%甘油對抗體的標記效率有較大影響。標記前應盡量去除干凈；
3. 試劑盒組份在運輸過程中可能造成顛倒，會使液體或干粉試劑沾到管壁或瓶蓋上。使用前請離心處理，以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底；
4. DMSO屬微毒類，對人體皮膚有滲透性，眼有刺激作用，使用時避免與皮膚，眼睛和黏膜接觸。
附表
*：以nm為單位的激發波長
ε：Amax時的摩爾消光系數(M-1?cm-1)
Cf：校正系數(A280/Amax)
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貨號 | 名稱 |
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SALK0003 | <