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產(chǎn)品介紹
Polybrene（聚凝胺，hexadimethrine bromide）是一種多聚陽離子聚合物，

常用于哺乳動物細胞的DNA轉(zhuǎn)染實驗以增強脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率。

Polybrene目前廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒介導的基因轉(zhuǎn)染，慢病毒介導的基因轉(zhuǎn)染，

作用機理可能是通過中和細胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進吸附作用。

Polybrene也是一種有名的抗肝素劑（肝素拮抗劑），

常用來生產(chǎn)非特異性凝集的紅細胞。另外Polybrene也多用于蛋白測序，

因為小劑量的Polybrene在自動測序分析可明顯改善多肽的降解現(xiàn)象。

PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性。

? ? ? 本產(chǎn)品為即用型溶液，粉末用0.9%NaCl配置成10mg/ml的溶液，

并用0.22μM濾膜過濾除菌。使用時一般按1:1000-1：2000稀釋，

依細胞種類不同稀釋比例不同，具體查閱相關(guān)文獻。

? ? ??注：Polybrene對某些細胞（如末端分化的神經(jīng)元，DC細胞）毒性較大，

初次應(yīng)用建議先做毒性測試。

操作步驟(僅供參考，具體使用濃度請參考相關(guān)文獻)

實驗 1：逆轉(zhuǎn)錄病毒感染（Retroviral Infection）
1. 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒原液的制備：

取 5ml 生長培養(yǎng)基（5%血清）加入約含單層轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)錄包裝細胞的 100mm 培養(yǎng)盤內(nèi)。

孵育 24h 后，吸去培養(yǎng)液并用 0.45μm 濾器過濾。
2. 待感染細胞的培養(yǎng)：

100mm 培養(yǎng)盤內(nèi)加入 10ml 完全培養(yǎng)基，

細胞密度為 5×105/盤。

3. 病毒感染：細胞培養(yǎng) 24h 后，吸去完全培養(yǎng)液。

用含 polybrene 的 2ml 病毒上清 （或?qū)⒉《驹合♂尩?2ml）感染細胞，polybrene 的終濃度為 5μg-10μg/ml。37°C 孵育 3-6h。

4. 收集病毒顆粒：加入 8ml 完全培養(yǎng)基。

感染 3 天后，按照 1:5 的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細胞。

實驗 2：轉(zhuǎn)染
1. 完全生長培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，培養(yǎng)細胞密度約 50%；
2. 孵育細胞 18-24h 后準備 DNA-培養(yǎng)基- Polybrene 混合液，按如下操作制備混合液：

①添加完全培養(yǎng)基（60mm 培養(yǎng)皿 2ml，100mm 培養(yǎng)皿 3ml），37°C 預熱；

②添加 10ng~10μg 質(zhì)粒輕輕混勻；

③加入 Polybrene 至終濃度為 5μg-10μg/ml。

輕輕混勻。以上每個成分需要按順序加入。
3. 去除培養(yǎng)基，在細胞中加入 DNA-培養(yǎng)基-Polybrene 溶液，在 37°C 孵育細胞 6-20h。

細胞培養(yǎng)的前 6h 內(nèi)約每 1.5h 輕柔混勻。
4. 去除 DNA-培養(yǎng)基-Polybrene 溶液。

用 DMSO shock solution（15%DMSO in 1X HBSS）輕輕蓋住細胞（60mm 培養(yǎng)皿 3ml，100mm 培養(yǎng)皿 4ml）。

每次加入溶液時用手輕晃培養(yǎng)盤 10s，使得液體均勻分布。然后 37°C 孵育細胞 4min。
5. 立即去除 DMSO shock solution，用完全生長培養(yǎng)基輕輕清洗細胞 2 次。

對于 60mm 培養(yǎng)皿每次用 5ml 培養(yǎng)液清洗，100mm 培養(yǎng)皿每次用 10ml 培養(yǎng)液清洗。

6. 加入完全培養(yǎng)基到細胞中；
7. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)化：去除生長培養(yǎng)基，按照 1:5 的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細胞。

瞬時表達：去除生長培養(yǎng)基，加入新鮮的生長培養(yǎng)基。24-72h 后收獲細胞。

注意事項為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作