?索萊寶?動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組 DNA?提取試劑盒
貨號(hào)：D1700
規(guī)格：50T/ 100T
?保存：室溫(15℃-25℃)?干燥保存，復(fù)檢期 12?個(gè)月，2℃-8℃保存時(shí)間更長(zhǎng)。
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試劑盒內(nèi)容： |
D1700-50T |
D1700-100T |
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RNase A |
1ml |
1ml×2 |
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蛋白酶 K |
1ml |
1ml×2 |
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溶液 A |
10ml |
20ml |
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溶液 B |
10ml |
20ml |
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漂洗液 |
15ml |
15ml×2 |
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洗脫液 |
10ml |
20ml |
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吸附柱 |
50 個(gè) |
100 個(gè) |
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收集管 |
50 個(gè) |
100 個(gè) |
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說(shuō)明書(shū) |
1 份 |
1 份 |
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
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本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA?的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，提取組織和細(xì)胞的基因組 DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司特有新型材料，能夠高效、專一吸附 DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白 及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。 提取的基因組 DNA?片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組 DNA 可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、?PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。
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操作步驟：
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使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入休積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī) 在室溫下離心。
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1、樣品的處理：
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a、細(xì)胞：取?1×106-1×107個(gè)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，12000rpm離心?1min收集細(xì)胞，貼壁細(xì)胞先用胰蛋白酶消化處?理，再用預(yù)冷的PBS吹打成細(xì)胞懸液，然后 12000rpm離心 1min收集細(xì)胞，盡量除去上清，加 200ul溶液A，振 蕩至徹底混勻。
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b、 組織：組織量不宜過(guò)大，一般不要超過(guò)?25mg，可以使用勻漿器勻漿，最好用液氮研磨成粉末狀，再用?預(yù)冷的 PBS?或無(wú)菌水充分懸浮，然后 12000rpm?離心 1min?收集細(xì)胞，盡量除去上清，加 200ul?溶液 A，振蕩至 徹底混勻。
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2、向懸浮液中加入?20ul (10mg/ml) 的?RNase A，55℃放置?15min。
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3、加入?20ul ( 10mg /ml ) 的蛋白酶?K，充分顛倒混勻，55℃水浴消化，細(xì)胞消化時(shí)間較短，組織消化時(shí)間較長(zhǎng)，?一般需要 1-3?個(gè)小時(shí)才能完成（鼠尾需要消化過(guò)夜）。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至樣品消化完全為止。 消化完全的指標(biāo)是：液體清亮及粘稠。
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4、加入?200ul 體積溶液?B，充分顛倒混勻，如出現(xiàn)白色沉淀，可放置于?75℃?15-30min，沉淀即會(huì)消失，不影
響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明樣品消化不徹底，可能導(dǎo)致提取的 DNA?量少及不純，還有可能導(dǎo)致堵塞 吸附柱。
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5、加入?200ul 無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響?DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都?加入吸附柱中。
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6、12000rpm 離心?1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
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7、向吸附柱中加入?700ul 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，?12000rpm 離心?1min，棄廢液，將吸?附柱放入收集管中。
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8、向吸附柱中加入?500ul 漂洗液，12000rpm 離心?1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
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9、12000rpm 離心?2min，將吸附柱敞口置于室溫或?50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，?否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR?等。 10、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加?50-200ul 經(jīng)?65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置
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5min，12000rpm 離心?2min。
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11、可將離心所得洗脫液再加入吸附柱中，12000rpm 離心?2min，即可得到高質(zhì)量的基因組?DNA。
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注意事項(xiàng):
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1、試劑盒拆封后，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。?2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。?3、如果試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響效果。?4、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率:洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要?用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH?值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。
