貨號(hào)：D0010
規(guī)格：100T
保存：低溫運(yùn)輸，冰袋運(yùn)輸。-20℃保存 12 個(gè)月。長期保存推薦 -80℃。
產(chǎn)品內(nèi)容：
| 組分編號(hào)? ? | 名稱 | 100 次 | 1000 次 |
| A | 細(xì)胞裂解液 | 60 mL | 60 mL*10 |
| B | 螢火蟲熒光素酶緩沖液? | 10 mL | 10 mL*10 |
| C | 螢火蟲熒光素酶底物（50 X） | 200 μL | 200 μL*10 |
| D | 海腎熒光素酶緩沖液? | 10 mL | 10 mL*10 |
| E | 海腎熒光素酶底物（50 X）? | 200 μL | 200 μL*10 |
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注意：螢火蟲熒光素酶反應(yīng)工作液和海腎熒光素酶反應(yīng)工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
產(chǎn)品說明：
螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）大小為61 KDa，單亞基蛋白，能夠催化熒光素（luciferin）氧化， 生成氧化熒光素oxyluciferin；海腎熒光素酶（Renilla luciferase）為36 KDa的單亞基蛋白，能夠催化腔 腸素（coelenterazine）氧化形成coelenteramide。二者在翻譯后均無需修飾即可發(fā)揮作用。
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒首先以熒光素為底物來檢 測螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因的活性，之后在淬滅該熒光反應(yīng)的同時(shí)，以腔腸素為底物檢測海腎熒光素酶報(bào) 告基因的活性。其檢測機(jī)理
機(jī)理如圖所示：
螢火蟲螢光素酶催化luciferin發(fā)光的最強(qiáng)發(fā)光波長為560 nm。海腎螢光素酶催化coelenterazine發(fā)光 的最強(qiáng)發(fā)光波長為465 nm。
通常將目的基因的5′UTR或者啟動(dòng)子克隆至Firefly Luciferase的上游，或者3′UTR克隆至Firefly Luciferase的下游，通過檢測螢火蟲熒光素酶的量來檢測啟動(dòng)子或者調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。Renilla Luciferase作為內(nèi)參，來消除細(xì)胞數(shù)量或者轉(zhuǎn)染效率的差異。
實(shí)驗(yàn)步驟
1：裂解細(xì)胞
1）將細(xì)胞裂解液充分混勻，按如下方式加入細(xì)胞裂解液，充分裂解細(xì)胞。
a: 對于貼壁細(xì)胞，吸盡細(xì)胞培養(yǎng)液，按照下表比例加入細(xì)胞裂解液，輕輕旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)板使裂 解液完全覆蓋細(xì)胞；
b: 對于懸浮細(xì)胞，離心棄去上清，按照下表比例加入裂解液，
| 細(xì)胞培養(yǎng)板? | 96 孔板? | 48 孔板? | 24 孔板? | 12 孔板? | 6 孔板 |
| 裂解液加入量?? | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 300 μL? | 500 μL |
2）冰上孵育 5 min，充分裂解細(xì)胞。
3）（選作）10000-16000rpm 離心 1 min，取上清。
2：熒光檢測
1）取20 μL 細(xì)胞裂解液，加至黑色酶標(biāo)板中。按照實(shí)驗(yàn)需要，可設(shè)置 3 孔-5 孔重復(fù)。
2）配制螢火蟲熒光素酶反應(yīng)工作液和海腎熒光素酶反應(yīng)液，即螢火蟲熒光素酶底物（50 X）和海腎 熒光素酶底物（50 X） 分別用對應(yīng)的緩沖液稀釋至 1 X 工作液。并孵育至室溫。
3）加入 100 μL 螢火蟲熒光素酶反應(yīng)液，震板混勻，檢測螢火蟲熒光素酶的活力，檢測盡量在 30 min 內(nèi) 完成。
4）加入 100 μL 海腎熒光素酶反應(yīng)液，震板混勻，檢測海腎熒光素酶的活力，檢測盡量在 30 min 內(nèi)完 成。
5）分析數(shù)據(jù)。?
注意事項(xiàng)
1）檢測過程中需自備耗材和設(shè)備包括如下：PBS；100 μL 移液器或者排槍；黑色酶標(biāo)板； Luminometer 發(fā)光計(jì)或者多功能酶標(biāo)儀或者其他能夠檢測生物發(fā)光的儀器。
2）關(guān)于檢測儀器的選擇：能夠檢測化學(xué)發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都可適用于此試劑盒。如果使用多 功能酶標(biāo)儀，為防止各孔之間的干擾，我們推薦使用黑色酶標(biāo)板，并且不同實(shí)驗(yàn)組之間最好有間隔。
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