補料分批細胞培養需要進行澄清步驟,以收獲產物,而不改變產物質量。在進行進一步的下游工藝及上樣至昂貴的捕獲層析柱之前,盡可能去除細胞碎片和固體物質非常重要,以提高層析柱的壽命及產物純度。離心和深層過濾是當前標準的澄清技術,但其通常需要進行開放式操作,且設備占地較大。此外,此類多階段工藝往往費時費力,難以規模放大,且可能影響蛋白質收率。‘
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這里,我們介紹一種可放大的單步澄清方法,高產量收獲(HPH),其是在補料分批培養中使用XCell ATF系統的新方法。與離心和深層過濾不同的是,HPH可實現整合式的澄清操作,同時維持細胞活性,并使蛋白質降解最小化。相比傳統工藝,HPH已被證實可顯著提高蛋白質生產。
在本案例研究中,在補料分批培養結束前4天,使用XCellTM ATF系統,以0.25、0.5和1.0 VVD的速度進行HPH。在此期間,灌流方法通過更新營養底物,去除毒性副產物,而可提高活細胞密度(VCD),并維持細胞活性>90%。在培養的最后一天,使用相同的XCellTM ATF系統從生物反應器收獲剩余的蛋白質。結果顯示,蛋白質產量可翻倍,細胞懸液被澄清,而不增加原補料分批的工藝時間。整個工藝在整合式、封閉且無生物負載的環境中以單步形式進行,獲得可直接用于下游純化的澄清產物。
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