Kinase-Lumi?超強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光法激酶活性檢測(cè)試劑盒(Kinase-Lumi? Max Luminescent Kinase Assay Kit)，是一種通過(guò)化學(xué)發(fā)光法測(cè)定激酶反應(yīng)后溶液中ATP的剩余量(最高可達(dá)200μM)來(lái)定量檢測(cè)激酶活性的試劑盒。本試劑盒也可用于檢測(cè)任何消耗ATP的酶，例如ATPase。
本試劑盒可以檢測(cè)反應(yīng)體系中濃度高達(dá)200μM的ATP，并在0-200μM范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。對(duì)于更低濃度的ATP可以選購(gòu)檢測(cè)濃度上限為10μM的Kinase-Lumi?化學(xué)發(fā)光法激酶活性檢測(cè)試劑盒(Kinase-Lumi? Luminescent Kinase Assay Kit)或上限為50μM的Kinase-Lumi?增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光法激酶活性檢測(cè)試劑盒(Kinase-Lumi? Plus Luminescent Kinase Assay Kit)。另外兩個(gè)試劑盒分別在0-10μM和0-50μM范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。對(duì)于更高濃度的ATP需要適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行檢測(cè)。
本試劑盒應(yīng)用范圍廣，適用于各類消耗ATP的激酶，包括以蛋白或多肽為底物的蛋白激酶和以糖、脂、醇等為底物的非蛋白激酶。本試劑盒也同樣適用于檢測(cè)消耗ATP的ATPase。
本試劑盒的檢測(cè)激酶活性的原理參考圖1。激酶在反應(yīng)過(guò)程中催化ATP上的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到底物的羥基上，從而使ATP轉(zhuǎn)變?yōu)锳DP，這樣就可以根據(jù)ATP的減少量來(lái)定量激酶的活性。借助ATP依賴的螢光素酶(也稱熒光素酶)催化的螢光素發(fā)光反應(yīng)，ATP可以通過(guò)測(cè)定化學(xué)發(fā)光來(lái)進(jìn)行定量。這樣就可以通過(guò)設(shè)置ATP的標(biāo)準(zhǔn)曲線，來(lái)定量激酶反應(yīng)體系中的ATP剩余量，從而計(jì)算出ATP的消耗量，最終計(jì)算出激酶的活性。激酶的活性和ATP的剩余量成反比，即激酶活性越高，ATP剩余量越少，發(fā)光值越低；反之，激酶活性越低，ATP剩余量越多，發(fā)光值越高。
圖1. 本試劑盒檢測(cè)激酶活性的原理圖。
本試劑盒的使用非常便捷，對(duì)于待測(cè)樣品僅需加入等體積的檢測(cè)試劑即可完成檢測(cè)反應(yīng)，并且檢測(cè)反應(yīng)可以僅在一個(gè)孔內(nèi)完成。本試劑盒不僅適合少量樣品的檢測(cè)，也非常適合大量樣品的高通量篩選(high-throughput screening)檢測(cè)。
本試劑盒不僅操作特別方便，并且由于使用了熱穩(wěn)定的螢火蟲螢光素酶并對(duì)反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化，檢測(cè)體系的發(fā)光信號(hào)也非常穩(wěn)定。加入檢測(cè)試劑后10分鐘即可產(chǎn)生非常穩(wěn)定的化學(xué)發(fā)光，30分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光的下降通常不會(huì)超過(guò)10%。
對(duì)于96孔板，我們推薦使用50μl激酶反應(yīng)體系和50μl的檢測(cè)試劑，總體積為100μl，此時(shí)本試劑盒可以進(jìn)行200或2000次檢測(cè)。對(duì)于384孔板，我們推薦使用10μl激酶反應(yīng)體系和10μl的檢測(cè)試劑，總體積為20μl，此時(shí)本試劑盒可以進(jìn)行1000或10000次檢測(cè)。也可以用其它體積，但激酶反應(yīng)體積和檢測(cè)試劑體積的比例必須為1:1。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| S0158S-1 | Kinase-Lumi?超強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光法激酶活性檢測(cè)試劑 | 10ml |
| S0158S-2 | 0.5mM ATP | 0.2ml |
| — | 說(shuō)明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，半年有效。-80℃保存，一年有效。檢測(cè)試劑需避光保存。
注意事項(xiàng)：
本試劑盒的檢測(cè)試劑中含有螢光素酶，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致其逐漸失活。為取得較好的使用效果，第一次解凍后可適當(dāng)分裝，且分裝后的檢測(cè)試劑凍融次數(shù)不宜超過(guò)3次。反復(fù)凍融過(guò)程中，可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)試劑中出現(xiàn)少量沉淀，此時(shí)宜平衡至室溫，并盡量溶解。如仍有殘留的不溶物，可以離心去除后使用，經(jīng)測(cè)試不會(huì)影響后續(xù)的檢測(cè)效果。
建議激酶或ATPase的反應(yīng)盡量在室溫(約25℃)進(jìn)行，如果不是在室溫進(jìn)行，需把樣品平衡至室溫才能用本試劑盒檢測(cè)。
試劑盒中提供的ATP僅足夠用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測(cè)，用于激酶反應(yīng)的ATP需自備。
檢測(cè)時(shí)需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相鄰孔之間會(huì)產(chǎn)生相互干擾。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。