在7月初出版的Journalof Translational Medicine雜志（2020年影響因子5.531）刊登了首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院聯(lián)合廣州市胸科醫(yī)院、湖南省胸科醫(yī)院和新疆維吾爾自治區(qū)胸科醫(yī)院共同開展的一項(xiàng)前瞻性多中心診斷研究成果，該研究為活動(dòng)性結(jié)核病的精準(zhǔn)診斷提供了全新的思路與方法。
研究背景
結(jié)核病一直是全球特別是發(fā)展中國(guó)家的主要死因之一。WHO 推薦的結(jié)核病分子診斷方法在培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)核患者中有較好的效果，但它們的靈敏度難以涵蓋到培養(yǎng)陰性結(jié)核病例。IFN-γ釋放試驗(yàn)雖然可以用做結(jié)核感染診斷，但無(wú)法區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核和結(jié)核潛伏感染。在結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家，如何準(zhǔn)確診斷活動(dòng)性結(jié)核病，特別是實(shí)現(xiàn)菌陰結(jié)核的實(shí)驗(yàn)室診斷，是控制結(jié)核病傳播和終止結(jié)核的難點(diǎn)。在國(guó)家十三五傳染病防治科技重大專項(xiàng)支持下，該團(tuán)隊(duì)使用結(jié)核特異性細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2 聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)對(duì)上述問(wèn)題給出了新的解決方案。
研究方法
該項(xiàng)研究在2017年7月至2018年12月期間連續(xù)納入了3245例疑似結(jié)核患者，最終，2536例被診斷為活動(dòng)性肺結(jié)核和718例非結(jié)核病例，其中活動(dòng)性肺結(jié)核病例有1092例為結(jié)核病確診病例，1444例為臨床診斷病例(詳見Table 1)。對(duì)患者同時(shí)采取痰液樣本和血液樣本，針對(duì)每位受試者采集外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)結(jié)核特異性蛋白ESAT-6–CFP-10-Rv1985c刺激后，分析其IFN-γ和IL-2的釋放水平，建立活動(dòng)性結(jié)核預(yù)測(cè)模型。
研究結(jié)果
①新的檢測(cè)靶標(biāo)IL-2特異性高達(dá)94.3%
研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)IFN-γ的ROC 曲線下面積為0.859，而IL-2 的ROC 曲線面積0.865（詳見Fig. 2 ） ，IFN-γ的總體敏感性和特異性分別為83.8% 和81.5%，IL-2的特異性為94.3%，靈敏度為72.6%（詳見Table2）。
②新的檢測(cè)靶標(biāo)IL-2提高結(jié)核病的檢出率
雙因子檢測(cè)的敏感性為87.9%，單因子檢測(cè)敏感性為83.8%，敏感性的增加主要是由于引入新的檢測(cè)靶標(biāo)IL-2，表明約16%的活動(dòng)性結(jié)核患者中IFN-γ結(jié)果為陰性，而這些患者中有1/4的病例IL-2 結(jié)果為陽(yáng)性。當(dāng)IFN-γ和IL-2 串聯(lián)組合時(shí)，特異性進(jìn)一步提高到96.0%，可與分子診斷的培養(yǎng)陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果相媲美，甚至可以對(duì)培養(yǎng)陰性的患者產(chǎn)生可靠的結(jié)果。
③并聯(lián)檢測(cè)敏感性高達(dá)87.9%，串聯(lián)檢測(cè)特異性高達(dá)96.0%
進(jìn)一步分析IFN-γ和IL-2聯(lián)合應(yīng)用對(duì)活動(dòng)性結(jié)核病的診斷價(jià)值。對(duì)IFN-γ和IL-2 進(jìn)行并聯(lián)檢測(cè)時(shí)，敏感性升至最高的87.9%，特異性達(dá)到79.8%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值達(dá)93.9%；當(dāng)IFN-γ和IL-2 進(jìn)行串聯(lián)檢測(cè)時(shí)，718 例非結(jié)核患者中有689 例檢測(cè)結(jié)果為陰性，特異性為96.0%，敏感性為68.5%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為98.4%。值得注意的是，串聯(lián)檢測(cè)在結(jié)核病確診患者的敏感性（72.1%），高于臨床診斷敏感性（65.8%），提示IFN-γ和IL-2串聯(lián)檢測(cè)的準(zhǔn)確度與結(jié)核病的嚴(yán)重程度相關(guān)。
④雙因子聯(lián)合檢測(cè)靈活性高，滿足不同的檢測(cè)場(chǎng)景
研究團(tuán)隊(duì)根據(jù)活動(dòng)性結(jié)核病不同流行模型，分別闡述了IFN-γ和IL-2聯(lián)合檢測(cè)在不同模型中診斷價(jià)值，并提出了適用于綜合性醫(yī)院和專科醫(yī)院各自的診斷算法。
在綜合性醫(yī)院中，約有10%的結(jié)核疑似患者最終確診為活動(dòng)性結(jié)核，與常規(guī)涂片鏡檢相比，使用具有更高敏感性的雙因子并聯(lián)檢測(cè)可幫助臨床醫(yī)生發(fā)現(xiàn)更多活動(dòng)性結(jié)核病患者（如圖B）；在結(jié)核病專科醫(yī)院，結(jié)核病疑似患者中活動(dòng)性結(jié)核病的比例達(dá)到50%，使用具有高特異性的雙因子串聯(lián)檢測(cè)可為活動(dòng)性結(jié)核病患者特別是菌陰結(jié)核患者提供診斷依據(jù)（如圖A）。
根據(jù)在不同醫(yī)院中結(jié)核病患者不同的比例，采用IFN-γ/IL-2并聯(lián)和串聯(lián)檢測(cè)進(jìn)行預(yù)測(cè)
迪澳生物DeFine.TB
結(jié)核分枝桿菌特異性細(xì)胞因子（IFN-γ和IL-2）檢測(cè)試劑是“十三五”國(guó)家科技重大專項(xiàng)傳染病防治專項(xiàng)成果轉(zhuǎn)化產(chǎn)品，目前國(guó)內(nèi)已獲批上市。該試劑盒的檢測(cè)原理與文章所用技術(shù)一致，選取了存在于結(jié)核分枝桿菌，但在卡介苗和大多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌中普遍缺失的RD1區(qū)和RD2區(qū)編碼的ESAT-6、CFP-10、Rv1985c蛋白，應(yīng)用基因工程技術(shù)將其表達(dá)成為融合蛋白（ESAT-6-CFP-10-Rv1985c）。
在檢測(cè)時(shí)，將人外周血單個(gè)核細(xì)胞從全血樣本中分離出來(lái) ，消除血液本底干擾因素，通過(guò)計(jì)數(shù)單個(gè)核細(xì)胞數(shù)量，排除人群中免疫細(xì)胞數(shù)量的個(gè)體差異影響。將定量的單個(gè)核細(xì)胞與融合蛋白ESAT-6-CFP-10-Rv1985c在細(xì)胞培養(yǎng)板上共培養(yǎng)，結(jié)核特異性 T 細(xì)胞由于記憶反應(yīng)而分泌γ-干擾素及白細(xì)胞介素-2因子，再利用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法，檢測(cè)培養(yǎng)上清中的γ-干擾素、白細(xì)胞介素-2的濃度，來(lái)判斷其是否存在結(jié)核分枝桿菌特異性的細(xì)胞免疫反應(yīng)。用于結(jié)核病的輔助診斷，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)活動(dòng)性結(jié)核患者，同時(shí)對(duì)于潛伏感染患者能夠進(jìn)行及時(shí)、準(zhǔn)確的排篩。
“雙因子”檢測(cè)臨床應(yīng)用的價(jià)值：
· 發(fā)現(xiàn)更多的活動(dòng)性結(jié)核患者
· 病原學(xué)陰性結(jié)核病的輔助診斷
· 用于免疫抑制劑用藥前結(jié)核感染的排查
· 健康及高危人群結(jié)核病的篩查
· 肺外結(jié)核病的輔助診斷
· 非結(jié)核病的鑒別診斷
· 治療過(guò)程中結(jié)核病活化狀態(tài)風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)