FITC標記賴氨酸葡聚糖
FITC標記賴氨酸葡聚糖是一類多糖衍生物，既帶游離伯胺和羧酸，也帶有熒光染料熒光素（FTIC）。賴氨酸是一種天然存在的氨基酸，在生物化學和生命科學領域廣泛用于結合和固定。
FITC標記賴氨酸葡聚糖也被稱為Fluoro-emerald?或fluoroemerald ?。經純化后，所有批次都需檢測分子量，取代度，干燥失重和游離FITC。FITC標記賴氨酸葡聚糖為黃色至橙色粉末，分子量范圍從4 kDa到500 kDa。
熒光素(FITC)是一種熒光明亮的染料，廣為使用，在493nm吸收。在520nm處發光。 高質量的FITC標記賴氨酸葡聚糖具備:
- 優異的分子量分布（多分散性低）
- 明亮的熒光
- 可用于細胞和組織的固定
- 易與染料或生物分子結合
- 完全水溶性，在溶液或保質期內具有穩定性佳
結構
FITC標記賴氨酸葡聚糖由來源于腸系膜明串珠菌的特征鮮明的葡聚糖組分合成。葡聚糖先用賴氨酸標記，然后在溫和條件下使用FITC功能化，形成FITC標記賴氨酸葡聚糖。賴氨酸的取代度在0.005-0.03 (mol賴氨酸/mol葡萄糖)，而FITC的取代度為0.001-0.01 (mol FITC/mol 葡萄糖)。
圖 1. FITC標記賴氨酸葡聚糖的結構式。賴氨酸主要和葡聚糖在賴氨酸的ε-還是α-氨基位置結合未明確。
賴氨酸葡聚糖 (or Dextran-lysine-fixable) 是由來自腸系膜白串珠菌的葡聚糖的特定片段通過賴氨酸標記而合成的。然后用FITC在溫和條件下功能化得到FITC標記賴氨酸葡聚糖。經純化，控制產品的分子量，外觀，溶解度，取代度，pH，游離賴氨酸和游離FITC。產品的分子量是由對應的葡聚糖片段的相近分子量來確定的。例如，FITC標記賴氨酸葡聚糖4的分子量大約為4000 Da。實際分子量是通過GPC測定的。葡聚糖來源于腸系膜白串珠菌B-512F,由α-D-(1-6)線性葡聚糖組成， α-(1-3) 側鏈含量較低（2-5%）。葡聚糖的分子量范圍從4000 到500000，并且通過GPC，比旋，吸光率和其它參數嚴格控制質量。
物理性質
FITC標記賴氨酸葡聚糖是黃色至橙色粉末，極易溶于水或電解質溶液中。FITC標記賴氨酸葡聚糖不溶于大多數有機溶劑，例如乙醇，甲醇，丙酮，氯仿，乙酸乙酯等。 賴氨酸的取代度為0.005-0.03(mol賴氨酸/mol葡萄糖)。FITC的取代度是 0.001-0.01 (mol FITC/mol 葡萄糖)。 熒光素/FITC的最大激發波長為493 nm，最大發射波長為 520nm (圖2)。
圖2. FITC標記賴氨酸葡聚糖70在 pH 7.4 PBS溶液中(10 mg in 50 mL)的熒光圖譜。激發/發射波長493/516 nm。
儲存和穩定性
FITC標記賴氨酸葡聚糖的穩定性研究之前未見諸報道。不過，但根據葡聚糖的性質和賴氨酸與葡聚糖鏈的碳酰二胺化學鍵判斷，該物質具有較好的穩定性。FITC和賴氨酸之間的硫脲鍵是穩定的。若容器密封完好，室溫干燥條件下，FITC標記賴氨酸葡聚糖可以穩定保持6年。
應用
攜帶氨基的葡聚糖，作為生物結合和活體固定的工具（1,2），對于科學界而言價值非凡。賴氨酸結構中的游離氨基可以與激活的基團以共價鍵結合，例如NHS酯或異*酸酯，或者，與羧酸通過常規的肽偶聯劑偶聯，例如DCC，HOBt 以及HATU。 細胞和組織固定，使組分保持“類活體態”，并保持細胞滲透性，允許抗體可以進入細胞結構內，應用舉例，用于顯微研究和免疫轉染。賴氨酸結合葡聚糖通過與固定劑反應（本文使用的是甲醛或戊二醛），與類似蛋白質和脂質體的生物大分子形成共價交聯，使整個體系和葡聚糖固定。這個在分子成像定性或定量評估生物事件時，具有十分獨特的重要意義。如果沒有固定，在活體系統內的這些結構將迅速分散和分解。熒光素/FITC最大激發波長為493 nm，最大發射波長為 520nm 。
產品列表
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產品編號
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品名
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分子量(kDa)
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包裝
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FITC-lysine-dextran 4
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4
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10 mg
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5 mg
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FITC-lysine-dextran 10
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10
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10 mg
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50 mg
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FITC-lysine-dextran 70
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70
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10 mg
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50 mg
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FITC-lysine-dextran 500
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500
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10 mg
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50 mg
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參考文獻
1. (a) Henley JR, Krueger EW, Oswald BJ, McNiven MA, J Cell Biol (1998) 141:85-99;
2. (b) Fritzsch B, Christensen MA, Nichols DH; J Neurobiol. 1993 Nov; 24(11):1481-99;
3. (c) Fritzsch B., J Neurosci Methods (1993) 50:95-103.
4. Schmued, L., Kyriakidis, K., Heimer, L., Brain Res., 526, (1990) 127-134
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