PBMC
外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cells ，PBMC）是免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分,因此在免疫學(xué)、傳染病、惡性腫瘤、疫苗研發(fā)、移植治療、個(gè)性化醫(yī)學(xué)和毒理學(xué)等領(lǐng)域作為最基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)原料被廣泛使用。
從血液制備PBMC是分離特定免疫細(xì)胞亞群之前常見(jiàn)的一個(gè)步驟。最常用的PBMC分選方法是使用密度梯度離心液進(jìn)行離心。
使用普通離心管分離PBMC的標(biāo)準(zhǔn)流程
聽(tīng)起來(lái)似乎很簡(jiǎn)單，但小心翼翼的加樣、繁瑣的步驟將拉長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)間、增加錯(cuò)誤率。
PBMC分選神器
耐思外周血淋巴細(xì)胞分離管
耐思外周血淋巴細(xì)胞分離管通過(guò)獨(dú)特的嵌套幫助你完美避坑。
? 無(wú)需小心翼翼地加樣
? 無(wú)需小心地吸取細(xì)胞白膜層收集細(xì)胞
? 避免紅細(xì)胞和粒細(xì)胞再次污染
短短的15min，通過(guò)離心、傾倒即可完成PBMC分選。
分離管特性
1. 快速分離，僅需15min即可迅速完成PBMC分選。
2. 操作簡(jiǎn)單，無(wú)需小心而費(fèi)力地將樣本加于密度梯度離心液面，收集PBMCs細(xì)胞時(shí)，只需從離心管中簡(jiǎn)單傾倒，無(wú)需其他技術(shù)性的專(zhuān)業(yè)操作。
3. 一致性好，降低錯(cuò)誤，減少不同用戶(hù)間的操作差異。
4. 電子束滅菌，SAL=10-6
5. 無(wú)熱源、無(wú)核酸酶
使用方法
? 前期準(zhǔn)備
1. 將分離液的溫度平衡至室溫（RT），避光。
2. 樣品準(zhǔn)備：抗凝全血或骨髓。根據(jù)樣本濃度狀態(tài)，可適當(dāng)用生理鹽水稀釋?zhuān)岣叻蛛x效果。
? 分離過(guò)程
1. 將分離液用移液管從分離管嵌套的中心孔中加入：15ml的分離管需要加入約4ml分離液；50ml的分離管需要加入約13ml分離液，確保分離液覆蓋嵌套上方。
2. 將抗凝樣本沿管壁緩慢倒入或用移液管沿管壁緩慢加入到分離管中。
3. 室溫下離心10min，離心力為1200 x g。
4. 收獲PBMCs細(xì)胞，將分離管中上清倒入另一干凈離心管中，分離管中的嵌套能有效避免紅細(xì)胞和粒細(xì)胞再次污染。（注意：離心后傾倒收獲細(xì)胞前，也可先吸取采集或丟棄最上層血漿層，有助于減少細(xì)胞被血小板污染。）
5. 用PBS洗滌PBMCs細(xì)胞，在250 x g離心力下離心10min。
6. 按步驟5重復(fù)洗滌2次，用5ml PBS緩沖液重懸細(xì)胞。
使用耐思外周血淋巴細(xì)胞分離管分離PBMC操作步驟
離心后液體分離情況（從上到下）：a血漿層；b富集的細(xì)胞部分（PBMCs）；c分離液；d嵌套；e沉淀（紅細(xì)胞和粒細(xì)胞）。
注意事項(xiàng)
1. 可用于人類(lèi)外周血、骨髓和臍帶血樣本。不適用于血凝等異常樣本或超過(guò)48小時(shí)的樣本。
2. 15ml的分離管建議使用4-9ml樣本；50ml的分離管建議使用13-30ml樣本。
3. 對(duì)于放置24h以上的樣本，建議離心時(shí)間加長(zhǎng)。
4. 離心后收獲細(xì)胞前，也可先吸取采集或丟棄最上層血漿層，有助于防止被血小板污染。
5. 離心后傾倒上清時(shí)不要將分離管倒置2s以上。
6. 分離管請(qǐng)勿重復(fù)使用。
7. 離心后，細(xì)胞可能聚集在富集層以上的分離管的管壁上。這種聚合是正常的，受樣本質(zhì)量、樣本放置時(shí)間和抗凝劑類(lèi)型的影響。此聚合與分離管的使用無(wú)關(guān)。細(xì)胞可以通過(guò)使用移液管尖端輕刮聚集團(tuán)的一側(cè)來(lái)清除。