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?1.?樣品的準備。
細胞樣品：收集50-100萬左右的細胞。對于懸浮細胞，1000-2000g離心1分鐘后棄上清，加入300μl裂解液，輕輕吹打8-10次至固懸物溶解、溶液澄清；對于貼壁細胞，吸凈培養液后加入300μl裂解液，輕輕吹打5-10次至固懸物溶解、溶液澄清，轉移至一潔凈離心管內。
組織樣品：取15-20mg動物組織，置于液氮中研磨成粉末，立即加入600μl裂解液。也可將組織置于1.5ml離心管中，迅速加入600μl冰浴預冷的裂解液，用微型電動勻漿器勻漿，或者用普通玻璃勻漿器進行勻漿。研磨或勻漿后，輕輕吹打勻漿液8-10次，室溫放置3-5分鐘。然后約14,000g離心2分鐘，將上清液移至新的離心管中。對于比較容易裂解且勻漿很充分的組織(如肝組織、腦組織等)可以不用高速離心而直接進入步驟2。
注意：細胞的數量一般不超過500萬，不超過100萬細胞宜使用300μl裂解液，多于100萬細胞宜使用600μl裂解液。動物組織的用量一般不超過30mg，用量過多可能會因裂解不充分導致得率下降。組織樣品在裂解和離心后，離心管下部可能會有一些膠狀物質，宜作為上清轉移至下一步操作。如果棄除膠狀物，會導致得率下降約30-50%。后續加入結合液后膠狀物會消失。離心是為了去除未勻漿充分的明顯塊狀物。如果裂解后仍有粘稠物，需增加吹打次數至溶液完全澄清。對于富含RNase的樣品，裂解液中宜添加DTT至終濃度為40mM或添加β-巰基乙醇至終濃度為1%。
2.?加入等體積結合液至裂解液中，輕輕顛倒混勻3-5次。此時可能會有沉淀物產生，屬于正常現象。
3.?將混合物(包括沉淀物)轉移至純化柱內，12,000g離心30秒，倒棄收集管內液體。
注意：當裂解液的體積大于300μl時，在加入等體積結合液后，總體積會超過純化柱的容量，這時應分成2次過柱，即將一半的混合物過柱后，再將剩余的混合物重復步驟3一次。對于一些特殊的樣品，如出現溶液未完全通過時，可延長離心時間至1-2分鐘，或者加大離心力至16,000g。對于一些能快速啟動達到12,000g的離心機，離心30秒已經足夠，對于一些啟動速度緩慢的離心機本步驟及后續步驟中的30秒離心宜調整為60秒。
4.?加入600μl洗滌液I，12,000g離心30秒，倒棄收集管內液體。
5.?加入600μl洗滌液II，12,000g離心30秒，倒棄收集管內液體。
6.?重復步驟5一次。
7.?最高速(約14,000-16,000g)離心2分鐘，去除殘留的液體。
8.?將RNA純化柱置于本試劑盒提供的RNA洗脫管中，加入30-50μl洗脫液，室溫放置2-3分鐘，最高速離心30秒，所得溶液即為純化的RNA。
注意：洗脫液需要加到純化柱柱面中央，使其被完全吸收。如需獲得更高濃度的樣品，可把洗脫液的體積減小至20μl，但洗脫下來的RNA量會相對減少。室溫較低時，洗脫液在37℃預熱片刻對得率有所幫助。此外，洗脫后的溶液再次加回到原純化柱再離心洗脫一次，可提高得率約10-30%；或者在第一次洗脫后使用新的洗脫液再洗脫一次，會獲得約為第一次洗脫量15-40%的RNA。