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描述
Pierce BCA 蛋白定量試劑盒是一種雙組分、高精度、兼容去垢劑的蛋白定量試劑，可準確測定蛋白濃度。對于蛋白研究中的常見樣品類型，Pierce BCA 試劑均可準確測定蛋白濃度。Pierce BCA 試劑可用于評估全細胞裂解物、親和柱分離組分和蛋白樣品純化的產(chǎn)量，還可在工業(yè)應(yīng)用中用于蛋白污染的監(jiān)測。與大多數(shù)染料結(jié)合法相比，BCA蛋白定量法受蛋白質(zhì)氨基酸組成差異的影響更小，因此有更高的蛋白間定量一致性。
BCA 蛋白定量試劑盒的特點包括：
?比色法測量—可以目測評估，也可使用標準分光光度計或酶標儀 (562 nm) 進行測量
??高度一致性—與染料結(jié)合法 (Bradford) 相比，BCA定量法的蛋白間差異更小
??兼容性強—在大多數(shù)離子型和非離子型去污劑的常見濃度下，性能不受影響
??定量時間—30 分鐘孵育；與傳統(tǒng) Lowry 法相比，操作更簡單，且檢測速度快 4 倍
??檢測范圍—BSA 的線性工作范圍為 20 至 2000 μg/mL
??高靈敏度—使用增強方案，可檢測濃度低至 5 μg/mL 的樣品
測定工作原理
BCA 蛋白測定法是在堿性環(huán)境下，通過蛋白將 Cu2+?還原為 Cu1+?，再通過二辛可寧酸 (BCA) 來檢測亞銅陽離子 (Cu1+) 。第一步是銅與堿性環(huán)境中的蛋白質(zhì)螯合，形成淺藍色復合物，這一過程被稱為雙縮脲反應(yīng)。在該反應(yīng)（雙縮脲反應(yīng)）中，由三個或更多氨基酸殘基的肽在含酒石酸鈉鉀的堿性環(huán)境中與銅離子形成有色螯合復合物。
在顯色反應(yīng)的第二步中，BCA 與第一步形成的還原型（亞銅）陽離子發(fā)生反應(yīng)。兩分子 BCA 與一個亞銅離子螯合，產(chǎn)生深紫色反應(yīng)產(chǎn)物。BCA/銅復合物是水溶性的，在 562 nm 處具有強線性吸收，且吸收度隨蛋白質(zhì)濃度增加而升高。該復合物的靈敏度（檢測下限）大約是第一個反應(yīng)中淡藍色的 100 倍。
反應(yīng)很大程度上受到蛋白氨基酸序列中四個氨基酸殘基（半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸和色氨酸）的影響。然而，不同于考馬斯染料結(jié)合法，肽鏈也有助于顏色形成，因此可將不同蛋白間的測量差異降至最低