2020年的11月11日，《中國癌癥防治雜志》正式發(fā)表了《腫瘤突變負(fù)荷檢測及臨床應(yīng)用中國專家共識（2020年版）》，TMB作為近幾年免疫治療療效敏感性評估的關(guān)鍵生物標(biāo)志物，已成為臨床基因檢測的標(biāo)配，但檢測方法、閾值和報告格式缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。此TMB專家共識結(jié)合中國實踐，為臨床提供了以下8條TMB檢測及應(yīng)用共識推薦。
TMB的定義
TMB一般是指特定區(qū)域內(nèi)體細(xì)胞非同義突變的個數(shù)，通常用每兆堿基有多少個突變表示（XX 個突變/Mb）。TMB 評估受樣本質(zhì)量和數(shù)量、檢測基因組大小、生信分析方法等多種因素影響，臨床應(yīng)用前應(yīng)了解TMB 的適用范圍。不同檢測方法獲得的TMB應(yīng)進(jìn)行系統(tǒng)評估,判斷是否具有可比性。TMB 數(shù)值可反映腫瘤內(nèi)產(chǎn)生腫瘤新抗原的潛力，與DNA修復(fù)缺陷密切相關(guān)，在多種腫瘤中dMMR和MSI-H患者具有較高的TMB。
tTMB可作為免疫治療獨立的療效預(yù)測生物標(biāo)志物
tTMB是一個新興的獨立ICIs 治療療效預(yù)測標(biāo)志物，與多種腫瘤類型ICIs 單藥或兩種ICIs聯(lián)合治療的療效相關(guān)，已證實可作為泛癌種免疫治療療效的預(yù)測標(biāo)志物。推薦既往標(biāo)準(zhǔn)治療后疾病進(jìn)展且沒有更好替代療法的實體瘤患者，尤其是高TMB的患者進(jìn)行TMB檢測，有助于擴(kuò)大免疫治療獲益人群。中國人群TMB的獨立預(yù)測價值仍需更多前瞻性研究驗證。
血液TMB與tTMB具有顯著相關(guān)性
目前研究證據(jù)顯示在NSCLC中bTMB與tTMB 具有顯著相關(guān)性，但bTMB檢測無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。多項回顧性研究發(fā)現(xiàn)高bTMB與NSCLC患者接受單藥ICIs治療獲益顯著相關(guān)，但尚未獲得高級別前瞻性臨床研究證實。
TMB檢測的樣本收集、處理原則
推薦使用近期石蠟包埋腫瘤組織樣本進(jìn)行tTMB 檢測，待檢測組織應(yīng)首先完成病理質(zhì)控并確保惡性腫瘤細(xì)胞數(shù)能夠滿足檢測要求。為過濾胚系突變對后續(xù)tTMB評估的影響，應(yīng)采集患者外周血、唾液或正常組織作為對照樣本。建議優(yōu)先采用NMPA批準(zhǔn)上市的核酸提取試劑盒進(jìn)行基因組DNA提取，tTMB檢測實驗室應(yīng)根據(jù)實際需求建立合適的DNA樣品質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)和操作流程，對待測DNA樣品純度、濃度及片段化程度進(jìn)行嚴(yán)格質(zhì)控。腫瘤原發(fā)灶與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶組織均可用于tTMB評估。
TMB檢測的Panel設(shè)計和平臺選擇
采用靶向測序Panel進(jìn)行TMB 評估時，建議與WES評估的TMB進(jìn)行一致性評價。靶向測序Panel覆蓋范圍原則上不應(yīng)<1.0Mb，最低有效測序深度應(yīng)≥500X。建議進(jìn)行TMB檢測的靶向測序Panel盡可能涵蓋患者更多的其他分子遺傳信息，包括可指導(dǎo)靶向治療的驅(qū)動基因突變、與基因變異產(chǎn)生相關(guān)的免疫治療正向預(yù)測因子以及可能的免疫治療負(fù)向預(yù)測因子。目前已有多款NGS測序儀獲國家NMPA批準(zhǔn)用于臨床基因檢測，不同實驗室可依據(jù)樣本量、時效要求選擇不同測序平臺。
TMB算法的標(biāo)準(zhǔn)化要求
基于靶向測序Panel的TMB檢測應(yīng)以WES檢測為金標(biāo)準(zhǔn)，納入影響蛋白質(zhì)編碼的體細(xì)胞突變，應(yīng)保證檢出突變頻率>5%的體細(xì)胞突變，以保證TMB檢測值的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性；應(yīng)依托ICIs療效隨訪數(shù)據(jù)庫對基因組比對和突變檢出算法開展標(biāo)準(zhǔn)化研究；Panel檢測區(qū)域可影響TMB值，應(yīng)通過至少1000例WES數(shù)據(jù)予以校正。同時建議使用對照樣本過濾胚系變異。
TMB閾值的探索與臨床應(yīng)用
TMB值在不同癌種中存在顯著差異，應(yīng)依據(jù)ICIs臨床療效確定閾值，才能最大可能篩選出ICIs治療的潛在獲益人群。值得注意的是，不同靶向測序Panel的TMB檢測體系之間TMB閾值不能通用。
TMB報告模板的初步建議
TMB報告內(nèi)容除重點描述TMB計算原則和數(shù)值外，還應(yīng)針對癌種的免疫治療意義進(jìn)行解讀；同時還需系統(tǒng)評估Panel檢測的各種驅(qū)動基因突變情況，以全面解患者的腫瘤生物學(xué)特征，建議應(yīng)用分子腫瘤診治專家組模式（MTB）進(jìn)行臨床輔助決策.
在中國，目前還沒有基于腫瘤組織或血液的NGS大panel產(chǎn)品獲批，雖有多家腫瘤基因檢測公司正在積極注冊申報NGS大panel，但仍缺乏相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)化，尤其是TMB的檢測評估標(biāo)準(zhǔn)化。相信此次《腫瘤突變負(fù)荷檢測及臨床應(yīng)用中國專家共識（2020年版）》的發(fā)布，有助于推動NGS大panel檢測（包括TMB）的標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展和建立。
此前為了推動TMB這一生物標(biāo)志物的研究，促進(jìn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)范化，菁良推出的全球首創(chuàng)TMB質(zhì)控品能夠更好地幫助IVD企業(yè)進(jìn)行流程質(zhì)控，試劑盒性能確認(rèn)及產(chǎn)品注冊報證等。
產(chǎn)品特點
- 細(xì)胞來源的標(biāo)準(zhǔn)品高度模擬病人樣本
- 提供腫瘤來源細(xì)胞系及正常組織來源細(xì)胞系的配對樣本
- 產(chǎn)品形式豐富：gDNA、ctDNA、FFPE
- 經(jīng)過多家行業(yè)頂/級檢測公司測試，結(jié)果穩(wěn)定一致
- 提供標(biāo)準(zhǔn)品、配套完整WES數(shù)據(jù)、TMB分析流程及TMB參考值
- TMB值包含從3到26多個梯度
- 使用ddPCR驗證tumor和normal cell的比例
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