卡梅德生物(KMDTM Bioscience)多年來致力于酵母雙雜交系統(tǒng)(Yeast two-hybrid system，Y2H)的研究。我們的酵母雜交系統(tǒng)是由基于SMART法構(gòu)建的文庫、酵母菌株、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膱?bào)告基因、高表達(dá)載體組成的。這項(xiàng)技術(shù)可用于：研究蛋白的相互作用;確認(rèn)蛋白的交互作用;定義蛋白的交互域。
酵母雙雜交系統(tǒng)是一種體內(nèi)方法，用于鑒定編碼蛋白質(zhì)與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的新基因技術(shù)。該系統(tǒng)為識別相互作用的蛋白質(zhì)提供了多項(xiàng)創(chuàng)新，雙雜交系統(tǒng)是第一個(gè)檢測相互作用蛋白的遺傳和分子方法，該檢測是在體內(nèi)進(jìn)行的，這樣可以檢測天然結(jié)構(gòu)中的相互作用蛋白。因此，雙雜交系統(tǒng)在檢測微弱和瞬時(shí)蛋白質(zhì)相互作用方面具有無與倫比的靈敏度。此外，雙雜交系統(tǒng)能夠簡捷地得到編碼相互作用蛋白的基因序列，它只需構(gòu)建質(zhì)粒而不必準(zhǔn)備抗體或純化蛋白，無需其它體外檢測蛋白之間相互作用方法所必須的蛋白抽提、純化等繁瑣步驟。雙雜交系統(tǒng)可用于篩選文庫中編碼與已知靶蛋白相互作用的蛋白質(zhì)的基因，或測試已知蛋白質(zhì)的相互作用。
卡梅德生物科技研究室對酵母雙雜交系統(tǒng)(Y2H)原理的介紹：
傳統(tǒng)Y2H檢測的原理是利用報(bào)告基因，其激活依賴于特定的轉(zhuǎn)錄因子。具體而言，待測蛋白質(zhì)X和Y分別與 DNA 結(jié)合域 (BD) 和轉(zhuǎn)錄因子的激活域 (AD) 融合。BD-X 融合蛋白與報(bào)告基因啟動子的上游激活子序列 (UAS) 結(jié)合。在X和Y之間相互作用時(shí)，AD將被募集到啟動子，并重建功能性轉(zhuǎn)錄因子，從而觸發(fā)報(bào)告基因的后續(xù)轉(zhuǎn)錄(圖1)
作為一種基因技術(shù)，酵母雙雜交篩選提供了一種敏感且經(jīng)濟(jì)的方法來測試兩個(gè)目標(biāo)蛋白之間的直接相互作用，或使用蛋白質(zhì)作為誘餌來篩選從所需的細(xì)胞類型、組織或整個(gè)生物體制備的蛋白質(zhì)片段庫。通過測序所選酵母菌菌落中相應(yīng)的質(zhì)粒，確定相互作用。
實(shí)驗(yàn)步驟：
①創(chuàng)建BD-X誘餌
②通過BD-X誘餌測試自我激活
③執(zhí)行酵母雙雜交篩選和識別獵物
Y2H檢測服務(wù)：
為了研究大量蛋白質(zhì)的相互作用，科學(xué)家根據(jù)Y2H系統(tǒng)，開發(fā)了幾種系統(tǒng)以適應(yīng)不同蛋白質(zhì)的不同亞細(xì)胞定位和生化特征。KMD Bioscience為客戶提供多種系統(tǒng)的服務(wù)，以適應(yīng)不同項(xiàng)目的不同需求。
● 酵母單雜交系統(tǒng)：研究蛋白質(zhì)-DNA下相互作用
● 酵母三雜交系統(tǒng)：研究第三成分介導(dǎo)的蛋白質(zhì)的相互作用
● 分裂泛素Y2H系統(tǒng)：用于研究膜蛋白
卡梅德生物科技服務(wù)范圍：
我們提供一站式服務(wù)：從構(gòu)建文庫到陽性克隆的篩選，這樣可提高效率，避免錯(cuò)誤，從而為客戶從客觀上節(jié)省費(fèi)用。
服務(wù)內(nèi)容：
1、將誘餌靶基因連接到Y(jié)2H載體中去，并測序。誘餌靶基因可以是一段基因(酶切)或全長基因
2、測試誘餌基因的自我激活能力和毒性。
3、文庫篩選和交互驗(yàn)證。
4、陽性克隆的分離提取和DNA的測序。
客戶提供：
--不少于2? 的質(zhì)粒(含誘餌靶基因)
--該基因的DNA序列，以便我們設(shè)計(jì)合成方案，進(jìn)行人工合成(需收費(fèi))
交付內(nèi)容：
--陽性克隆若干及DNA測序結(jié)果
--每個(gè)陽性克隆不少于2? 質(zhì)粒
實(shí)驗(yàn)周期：約6-8周
卡梅德生物科技服務(wù)優(yōu)勢：
1、技術(shù)專家直接服務(wù)，滿足不同檢測需要;
2、高準(zhǔn)確度分析儀器，經(jīng)驗(yàn)豐富的操作以及嚴(yán)格的質(zhì)量管理，保證結(jié)果精準(zhǔn)可靠;
3、檢測效率高，檢測過程實(shí)時(shí)監(jiān)控;
4、儀器檢測靈敏度更高，樣品消耗量更低;
5、實(shí)驗(yàn)周期更短，節(jié)省客戶的等待時(shí)間;
6、提供真正的一站式服務(wù)：從構(gòu)建文庫到陽性克隆的篩選，這樣可提高效率，避免錯(cuò)誤，從而為客戶從客觀上節(jié)省費(fèi)用
服務(wù)流程
如果您對我們的服務(wù)項(xiàng)目感興趣，請直接撥打熱線電話：+86-022-8216-4980/156-0119-0182
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