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?【產品名稱】

通用名稱：甲型流感病毒（通用型）檢測試劑盒（實時熒光PCR法）

英文名稱：Influenza A virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規格】 25T/盒 & 50T/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于甲型流感病毒檢測，不進行病毒分型，可用于臨床甲型流感病毒感染的輔助診斷，但不作確診使用。

【檢驗原理】

本試劑盒針對甲型流感病毒基因組高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含甲型流感病毒基因組模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。

【主要組成成份】

注：陰性對照為人基因組DNA，陽性對照為失去活性的甲型流感病毒cDNA。

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

采用鼻拭子、咽拭子等方法獲得樣本。具體操作方法如下：

（1）鼻拭子： 操作者將沾濕的無菌拭子平行于上腭的角度輕輕地左右轉動從一側鼻孔插入至鼻道內鼻腭處，一般當拭子插入有阻力時再將拭子停留2～3s后緩慢轉動退出。

（2）咽拭子：操作者一手持壓舌板壓住病人舌后根，另一手拿住無菌拭子根部，然后將沾濕的無菌拭子左右兩面及拭子頭部快速且較用力地分別刮取扁桃腺兩側及咽后壁的分泌物。

（3）將鼻拭子和咽拭子一起放人盛有1.0ml生理鹽水的離心管中備用。

應避免標本間交叉污染。

標本收集后可立即檢測；若不能立即檢測，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存，標本應凍存于-80℃以下，避免反復凍融。

【檢驗方法】

1.?試劑準備（試劑準備區）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

（2）核算當次實驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數（1T）+陽性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數

（3）在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

2.樣本準備（樣本處理區）

用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本RNA各5 μl、終體積25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。

4.PCR（PCR擴增區）

（1）取樣本處理區準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。

（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行PCR擴增。