死細(xì)胞去除試劑盒

MagLive Dead Cell Removal Kit

保存：室溫。（開封后可以 2-8°C 保存） 規(guī)格：10 Tests / 25 Tests

簡介：

MagLive 死細(xì)胞去除試劑盒通過負(fù)選擇的磁性分離方法去除細(xì)胞培養(yǎng)過程中的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片。MagLive 可以去除死細(xì)胞、細(xì)胞碎片、游離的寡核苷酸。通過這樣的步驟后可以提高細(xì)胞培養(yǎng)的純度，改善數(shù)據(jù)分析的質(zhì)量，并對后續(xù)下游的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生積極的影響，對將來的分子生物學(xué)的細(xì)胞分析更為有效。MagLive 產(chǎn)品不含外源蛋白，如 Annexin-V（膜聯(lián)蛋白 V）。

MagLive 特點(diǎn)：

2 不含 Annexin-V

2 不含外源蛋白，不會污染

2 無菌溶液

2 一步去除死細(xì)胞、細(xì)胞碎片、游離寡核苷酸

2 不需要含鈣（Annexin-V 需要）的緩沖液

2 對于懸浮細(xì)胞尤其適用

2 和臺盼藍(lán)或 PI 死細(xì)胞檢測方法兼容

提供的實(shí)驗(yàn)材料：

MagLive 死細(xì)胞去除溶液：10T (1 mL) / 25T (2.5 mL)

其他未提供的所需實(shí)驗(yàn)材料：

1. 5ml 無菌培養(yǎng)管/試管

2. 15ml 無菌離心管

3. 離心機(jī)

4. 磁性分離器（磁力應(yīng)足夠大，否則納米級磁珠不容易被分離）

5. 移液器及吸頭

6. 無菌 PBS

7. 臺盼藍(lán)/細(xì)胞計(jì)數(shù)器等細(xì)胞計(jì)數(shù)相關(guān)耗材

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 收集不超過 5mL 的濃度為 1×10⁵～1×10⁶/mL 的懸浮細(xì)胞溶液至 5mL 的無菌聚苯乙烯培養(yǎng)管

/試管中并計(jì)數(shù)。

2. 對細(xì)胞懸浮液 300g 離心 5min。去除上清液，用 1mL 無菌 PBS 重懸。

注意：不同于 Annexin V 的細(xì)胞分離方法，本產(chǎn)品不需含 Ca²⁺緩沖液。

但我們建議對細(xì)胞懸液進(jìn)行血清饑餓處理，因?yàn)檠鍟绊懛蛛x效果。而且培養(yǎng)基中游離的蛋白也會影響分離效果，因?yàn)橛坞x的蛋白和死細(xì)胞會競爭與磁珠的結(jié)合。我們建議采用無蛋白培養(yǎng)基。

3. 對重懸后的溶液加入 0.1mL MagLive。使用移液器吸頭進(jìn)行輕柔吹吸兩次，以使溶液完全混勻。室溫孵育 5min。

注意：磁性分離的時(shí)間不能太長，否則活細(xì)胞會沉降，反而降低活細(xì)胞率。

4. 將試管放置在磁性分離器環(huán)境中 15min。本溶液中的死細(xì)胞、細(xì)胞碎片、游離的寡核苷酸等會被磁珠捕獲并吸附至磁鐵一側(cè)。應(yīng)使試管和磁鐵的距離越小越好。

說明：如果實(shí)驗(yàn)室沒有磁性分離器，可使用更經(jīng)濟(jì)的磁鐵代替。但其磁力應(yīng)足夠分離納米級磁珠。可以先采用常見細(xì)胞預(yù)實(shí)驗(yàn)，如 NIH3T3。

5. 保持試管不動。另取 1 支 15mL 無菌離心管。使用移液器吸頭輕柔的吸取細(xì)胞懸液（約 1mL） 轉(zhuǎn)移至新的 15mL 離心管中。注意不要吸取到磁珠層（參考注意事項(xiàng) 4）。

6. 吸取 9mL 無菌 PBS 緩沖液至 15mL 離心管。輕柔混勻，300g 離心 5min。去除上清液。

7. 使用細(xì)胞培養(yǎng)液將離心后的細(xì)胞進(jìn)行重懸。即可以進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)了。

以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)，亦可自行優(yōu)化。以上過程應(yīng)保持在無菌條件下進(jìn)行。

常見問題：

1. 細(xì)胞非懸浮狀態(tài)而是成團(tuán)狀態(tài)，是否可以使用 MagLive 死細(xì)胞去除試劑盒？

答：可以。需要先對成團(tuán)細(xì)胞進(jìn)行消化解離。推薦使用 Mildase 細(xì)胞消化液產(chǎn)品（訂購貨號：

HC0145）或 FCMase 細(xì)胞消化液（訂購貨號：HC0146）。

2. 對需要去除的懸浮溶液中細(xì)胞的濃度是否有要求？

答：有要求。如果細(xì)胞濃度過高會影響并降低死細(xì)胞的去除效率。因此，我們推薦細(xì)胞的濃度為 1×10⁵～1×10⁶/mL，最高不要超過 1×10⁷/mL。

3. 磁性分離后溶液的顏色依然是棕色的而非無色透明是什么原因？

答：本試劑的原理是磁珠分離，但未結(jié)合目標(biāo)死細(xì)胞的磁珠是不容易被磁吸的，所以一定時(shí)間內(nèi)溶液顏色并不會完全無色。未吸附的磁珠后續(xù)會被清洗掉（實(shí)驗(yàn)步驟 6）。