品牌：Solarbio | 貨號(hào)：PC0010
| 英文名稱 | Bradford Protein Assay Kit |
|---|---|
| 儲(chǔ)存條件 | BSA附件-20℃，其它試劑4℃，自訂購之日起九個(gè)月內(nèi)有效 |
| 單位 | 盒 |
bradford蛋白定量試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容：
組成 | 包裝（2500微孔) | 保存 |
5×G250染色液 | 100ml | 2-8℃ |
PBS稀釋液 | 30ml | 2-8℃ |
蛋白標(biāo)準(zhǔn)(5mg/ml BSA) | 1ml | -20℃ |
產(chǎn)品簡介：
考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm變?yōu)?/span>595nm，在一定的濃度范圍內(nèi)，測定的吸光度值A595與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM，但受略高濃度的去垢劑影響，需確保SDS的濃度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用索萊寶生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒。
操作說明：
一．微孔酶標(biāo)儀法?
1. 完全溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，取10ul，稀釋至250ul?，使終濃度為0.2mg/ml。待測蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。?
2. 5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻，取1ml 5×G250染色液，加入4ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。?
3. 將標(biāo)準(zhǔn)品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中，加PBS稀釋液補(bǔ)足到20微升。?
4. 將樣品作適當(dāng)稀釋（多做幾個(gè)梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋），加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時(shí)的誤差，標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確，所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后。?
5. 各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液，室溫放置3-5分鐘。?
6. 用酶標(biāo)儀測定A595，或560-610nm之間的其它波長的吸光度。?
7. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。?
二．分光光度計(jì)法?
如無酶標(biāo)儀，染色反應(yīng)可在離心管中進(jìn)行，反應(yīng)液混勻后加入比色皿中，使用分光光度計(jì)測定吸光值。步驟如下：????
1. 取八支（或者更多）干凈的10ml離心管，標(biāo)記上號(hào)。?
2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀釋至終濃度為0.2mg/ml。?
3. 5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻，取10ml 5×G250染色液，加入40ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4. 按下表加入試劑(以每孔5ml計(jì)，多余的用來清洗比色皿)
離心管號(hào) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7（樣品管1） | 8（樣品管2） | 9（樣品管3） |
標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA | 0ul | 100ul | 200ul | 300ul | 400ul | 500ul | 500ul適當(dāng)稀釋的樣品1 | 500ul適當(dāng)稀釋的樣品2 | …… |
PBS | 500ul | 400ul | 300ul | 200ul | 100ul | 0ul | 0ul | 0ul | 0ul |
1XG250染色液 | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml |
5.?反應(yīng)3分鐘后測OD值。為了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，可每間隔2分鐘加一管染色液，每間隔2分鐘測一管OD值。如下表：
離心管號(hào) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | …… |
加染色液（分鐘） | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | …… |
測OD值 | 3 | 5 | 7 | 9 | 11 | 13 | 15 | 17 | …… |
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此圖為伯樂酶標(biāo)儀680，單波長，570nm