百螢對(duì)最近收到的許多客戶關(guān)于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)遇到的問題進(jìn)行了總結(jié)歸納，希望可以給其他準(zhǔn)備/正在做相關(guān)實(shí)驗(yàn)的同學(xué)一點(diǎn)小小的幫助。
1.哪種水平的DNA純度最適合轉(zhuǎn)染？
回答：
雖然DNA純度和濃度有一定范圍，但是包括所選的轉(zhuǎn)染試劑在內(nèi)的幾個(gè)因素可能會(huì)影響特定的過(guò)程。
建議：
- 比較DNA /試劑濃度以獲得最佳性能。
- 在混合前檢測(cè)DNA和試劑的不同孵育時(shí)間。
- 將內(nèi)毒素水平盡可能保持在最低。
- A260 / A280的最理想純度范圍為（1.7-1.9），首先嘗試在此范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。
2.如何使用流式細(xì)胞儀確定轉(zhuǎn)染效率？
回答：
使用流式細(xì)胞儀，確定特定轉(zhuǎn)染程序非常容易：
建議：
- 使用未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行對(duì)照，并從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中減去基線強(qiáng)度數(shù)據(jù)。
- 信號(hào)強(qiáng)度圖是比較細(xì)胞系對(duì)不同轉(zhuǎn)染試劑反應(yīng)最簡(jiǎn)單有效的實(shí)驗(yàn)輔助工具。
一般不需要太多手動(dòng)分析，大多數(shù)儀器都具有自帶的FACS分析程序的軟件，可快速獲得結(jié)果。
3.轉(zhuǎn)染后我的細(xì)胞快要死了，我該怎么辦？
回答：
轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡有許多可能的原因，我們建議您使用以下三種方法進(jìn)行檢查：
- 在不使用試劑的情況下對(duì)DNA進(jìn)行額外的監(jiān)測(cè)：表達(dá)的蛋白質(zhì)可能具有毒性。
- 檢查是否有污染并根據(jù)需要進(jìn)行處理，或者使用新的培養(yǎng)液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
- 選擇抗生素可能太強(qiáng)或添加太早。請(qǐng)以更低的濃度和更長(zhǎng)的間隔再次嘗試實(shí)驗(yàn)。