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?酵母選擇性營養缺陷型培養基

一、選擇性營養缺陷型酵母培養基SD培養基(Synthetic Dropout Media)SC-Droupout

酵母缺陷培養基種類：一缺培養基單缺培養基/二缺培養基雙缺培養基/三缺培養基/四缺培養基/五缺培養基

(1)?一缺培養基：以SD-Ura(Sc-Ura培養基)為代表的此類酵母SC選擇培養基或SD缺陷培養基主要用于單質粒酵母轉化篩選

用途：外源基因在酵母中的表達、異源基因功能互補、酵母單雜交系統和酵母雙雜交系統初始質粒轉化

SD/-Trp，?SD/-Leu，?SD/-His，?SD/-Ura，?SD/-Met，?SD/-Ade

SC-Trp，SC-Leu，?SC-His，?SC-Ura，?SC-Met，?SC-Ade

(2)?二缺培養基：此類酵母SC選擇培養基－SD培養基用于雙質粒酵母轉化篩選

用途：外源基因在酵母中的表達、異源基因功能互補、酵母單雜交系統和酵母雙雜交系統初始質粒轉化

免疫共沉淀（Coimmunoprecipitation)、Y187和AH109 酵母交配實驗、接合型二倍體篩選

SD/-Trp-Leu，SD/-Trp-His，SD/-Trp-Ade，SD/-Leu-Ade，SD/-His-Ade，?SD/-Leu-His，?SD/-Ura-Trp，?SD/-Ura-Leu，SD/-Ura -His

SC-Trp-Leu，?SC-Trp-His，?SC-Trp-Ade，?SC-Leu-Ade，?SC-His-Ade，?SC-Leu-His，?SC-Ura-Trp，?SC-Ura-Leu，SC -Ura-His

(3)?三缺培養基：此類酵母SC選擇培養基－SD培養基用于雙質粒酵母轉化篩選和報告基因檢測

用途：外源基因在酵母中的表達、異源基因功能互補、酵母單雜交系統和酵母雙雜交系統報告基因檢測

Y187和AH109 酵母交配實驗后報告基因分析（His3，Ade2)

SD/-Trp-Leu-His ，SD/-Trp-Leu-Ade，?SD/-Ura-Trp-His，?SD/-Ura-Leu-His，SD/-Trp-His-Ade，?SD/-Ura-Trp-Leu

SC-Trp-Leu-His ，SC-Trp-Leu-Ade，?SC-Ura-Trp-His，?SC-Ura-Leu-His，SC-Trp-His-Ade，?SC-Ura-Trp-Leu

(4)?四缺培養基：此類酵母SC選擇培養基－SD培養基主要用于報告基因分析

用途：酵母雙雜交系統和酵母三雜交系統報告基因檢測?、Y187和AH109 酵母交配實驗后報告基因分析(His3，Ade2)

SD/-Trp-Leu-His-Ade，?SD/-Ura-Trp-Leu-His，?SD/-Ura-Trp-Leu-Met

SC-Trp-Leu-His-Ade，?SC-Ura-Trp-Leu-His，?SC-Ura-Trp-Leu-Met

(5)?五缺培養基：此類酵母SC選擇培養基－SD培養基主要用于報告基因分析和表型分析

用途：酵母三雜交系統報告基因檢測(His3，Ade2)、酵母營養缺陷型分離鑒定和表型分析

SD/-Trp-Leu-His-Ade-Met，?SD/-Ura-Trp-Leu-His-Ade，SD/-Ura-Trp-Leu-His-Met，SD/-Ura-Trp-Leu-Ade-Met

SD/-Ura-Leu-His-Ade-Met

SC-Trp-Leu-His-Ade-Met，?SC-Ura-Trp-Leu-His-Ade，SC-Ura-Trp-Leu-His-Met，SC-Ura-Trp-Leu-Ade-Met

SC-Ura-Leu-His-Ade-Met

(6)?六缺培養基：此類酵母SC選擇培養基－SD培養基主要用于報告基因分析、表型分析和藥物毒理分析

用途：酵母三雜交系統報告基因檢測、酵母營養缺陷型分離鑒定和表型分析、藥物毒理分析

SD/-Ura-Trp-Leu-His-Ade-Met，?SC-Ura-Trp-Leu-His-Ade-Met

上述培養基稱為選擇性營養缺陷型酵母培養基，主要用于酵母質粒轉化篩選，故又稱為酵母選擇培養基。

培養基配制方法注意事項：

1: 上述培養基含有各種所需成分(葡萄糖除外，因為有些研究者需要用其他糖類如用半乳糖誘導GAL1啟動子表達)，為各種氨基酸和酵母含氮堿/酵母氮源的精細混合物干粉，按照8g/L稱取，加水后即可配制成相應的培養液，?無需再購置添加Minimal SD Base或其他酵母氮源成分。高壓滅菌后加無菌葡萄糖至終濃度為2％(或棉子糖)或實驗所需的特定誘導物(如半乳糖用于GAL1啟動子誘導表達的劑量或濃度為2%)即可，適用于外源基因在酵母中的表達，酵母單雜交(yeast one-Hybrid)和酵母雙雜交(yeast two-Hybrid)系統等的選擇缺陷型培養，篩選含特定標志基因的酵母表型。

2: 在配制酵母缺陷培養基時，可以先加入葡萄糖后再高壓，對酵母的生長不會產生嚴重影響。但如加入葡萄糖后再高壓消毒則培養基會變色，由淺黃到深褐色不等，對細胞的生長還是有一定影響的（但在一般情況下不會影響實驗）。FunGenome suggestion: 由于氨基酸和葡萄糖在高溫高壓下可起化學反應，因此技術部不建議將葡萄糖加入后高壓，而建議用上述提示1的方法配制。

3: FunGenome suggestion : 棉子糖和半乳糖原則上是不能高溫高壓的，因為在高溫高壓下其化學結構會發生變化從而對誘導效果產生抑止，這一點特別提醒研究者務必注意，尤其是在做表達調節介導的功能互補實驗時至關重要！

4：制備平皿即軟瓊脂半固體培養基（瓊脂粉按2％即每100ml加2克瓊脂粉）用于轉化篩選時，高壓前需要將pH調至6.0左右（為方便起見，pH范圍可在5.6-6.5之間變化），而液體培養基則不需要調pH。

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